Elisa實(shí)驗(yàn)：ELISA試劑盒應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備

　　ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

　　ELISA試劑盒試劑特點(diǎn)——Elisa試驗(yàn)敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。

　　ELISA試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素。

　　ELISA試劑盒ELISA原理——ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

　　ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

　　1. 仔細(xì)閱讀說明書，確定試劑盒在有效期內(nèi)。

　　2. 按說明書確定所有試劑是否齊全，完整的滬鼎ELISA試劑盒包含30倍濃縮洗滌液, 酶標(biāo)試劑,酶標(biāo)包被板,樣品稀釋液,顯色劑A液,顯色劑B液,終止液,標(biāo)準(zhǔn)品,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,說明書,封板膜,密封袋等12個(gè)組成部分。另外要確認(rèn)試劑盒以外的材料是否齊全，如酶標(biāo)儀、移液器及吸頭、加樣槽、蒸餾水或去離子水、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)、37°C水浴鍋或恒溫箱、EP管、稀釋用聚丙烯試管、無粉一次性乳膠手套等。

　　3. 實(shí)驗(yàn)前，將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置半個(gè)小時(shí)，以讓試劑恢復(fù)到室溫。

　　4. 將10×的檢測(cè)緩沖液(Assay Buffer)稀釋到1×，吸取10X濃縮Assay buffer 5mL至50mL離心管，加蒸餾水至 50Ml，震蕩混勻備用。1×Assay buffer主要用于檢測(cè)抗體、HRP等濃縮液的稀釋。

　　5. 將20×的洗滌液稀釋到1×，吸取20X洗液50mL至1L量筒，加蒸餾水至1000Ml，混勻，轉(zhuǎn)移至干凈容器內(nèi)備用，洗滌液用于實(shí)驗(yàn)中的洗滌步驟。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象，可用37℃水浴微加熱使結(jié)晶wan全溶解后再配制洗滌液，(加熱溫度不要超過50℃)使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫。

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