實驗小課堂：影響ELISA試劑盒實驗的因素
 

　　一、試劑盒

　　1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活，結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質的反應靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;

　　2、酶結合物濃度過高，也會導致OD值假性增高。

　　二、試驗儀器

　　1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會使結果忽高忽低;

　　2、每次洗板前，應檢查洗板機針孔有無堵塞。
 

　　三、操作

　　1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結果假性降低;

　　2、加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性;

　　3、洗滌不充分，會使結果假性增高，過分洗滌呈假陰性;

　　4、比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應將板底擦干后進行比色，水汽或孔內氣泡也會使OD值升高;

　　5、抗原與抗體反應達到平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低于4℃，影響反應速度。

　　注：以上資料僅供參考。

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