小鼠Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書

　　貨號(hào)：BS-9374

　　名稱：小鼠Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒

　　規(guī)格：96T/48T

　　目前主流品牌的小鼠TLR3 ELISA試劑盒說明書框架和核心操作基本統(tǒng)一，以下是整理后的通用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)說明書，適配大多數(shù)科研用試劑盒：

　　小鼠Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒使用說明書

　　一、試劑盒原理

　　本試劑盒采用?雙抗體夾心法?檢測(cè)小鼠樣本中TLR3的含量：

　　預(yù)包被板上已包被小鼠TLR3特異性抗體，加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品后，目標(biāo)TLR3會(huì)與包被抗體結(jié)合;再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成"抗體-抗原-生物素化抗體"復(fù)合物;隨后結(jié)合HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，催化底物TMB顯色，顏色深淺與樣本中TLR3濃度呈正相關(guān)，通過酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度(OD值)即可計(jì)算樣本濃度。

　　二、試劑盒組分(96T規(guī)格)

　　三、適用樣本類型

　　可檢測(cè)小鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、細(xì)胞裂解液等樣本;腦脊液、尿液等特殊樣本需提前驗(yàn)證適配性。

　　四、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　試劑配制?：

　　洗滌液：20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋，室溫存放備用

　　標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品離心后加入樣本稀釋液溶解，定容至濃度1000pg/mL，室溫靜置10min后梯度倍比稀釋，得到1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/mL共8個(gè)濃度梯度

　　樣本預(yù)處理?：

　　血清/血漿：離心取上清，4℃保存不超過24h，長(zhǎng)期分裝-20℃凍存，避免反復(fù)凍融

　　組織勻漿：按1:9(質(zhì)量/體積)比例加入預(yù)冷PBS，研磨破碎后離心取上清，同上保存

　　提前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)，避免溫度差影響反應(yīng)。

　　五、標(biāo)準(zhǔn)操作步驟

　　加樣?：分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔、空白孔，空白孔加100μL樣本稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本孔每孔加100μL，輕輕晃動(dòng)混勻，封板后37℃孵育1h

　　洗板?：棄去液體，每孔加200μL洗滌液，靜置30s后棄去，重復(fù)洗板5次，拍干微孔板

　　加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體，封板后37℃孵育1h

　　洗板?：重復(fù)步驟2，洗板5次拍干

　　加酶結(jié)合物?：每孔加入100μL HRP-鏈霉親和素，封板后37℃避光孵育30min

　　洗板?：重復(fù)步驟2，洗板5次拍干

　　顯色?：每孔加入100μL TMB底物，37℃避光顯色15-30min(根據(jù)顏色深淺調(diào)整時(shí)間，避免過度顯色)

　　終止讀數(shù)?：每孔加入50μL終止液終止反應(yīng)，15min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下讀取各孔OD值

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，校正OD值(標(biāo)準(zhǔn)品OD值減去空白孔OD值)為縱坐標(biāo)，繪制四參數(shù)邏輯回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　根據(jù)樣本OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算得到樣本TLR3濃度，若樣本濃度超出線性范圍，需稀釋后重新檢測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即可

　　七、性能參數(shù)

　　檢測(cè)范圍：15.6pg/mL ~ 1000pg/mL

　　靈敏度：低檢測(cè)限<4pg/mL

　　重復(fù)性：批內(nèi)變異系數(shù)CV<8%，批間變異系數(shù)CV<10%

　　特異性：與小鼠其他TLR家族成員無(wú)交叉反應(yīng)

　　八、注意事項(xiàng)

　　試劑盒避免凍存，超過有效期禁止使用，不同批次試劑禁止混用

　　TMB底物避免接觸氧化劑和強(qiáng)光，顯色后及時(shí)讀數(shù)，終止后避免長(zhǎng)時(shí)間放置

　　實(shí)驗(yàn)過程中需佩戴手套、口罩，不同試劑更換槍頭，避免交叉污染

　　終止液為酸性溶液，操作時(shí)注意防護(hù)，若接觸皮膚及時(shí)清水沖洗

　　注：以上科研資料僅供參考!